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实验室百科 ----------药厂洁净室微生物污染经验总结

发布日期:2020-08-13

实验室百科 ----------药厂洁净室微生物污染经验总结

无菌药品的要求应该算在制药行业中最为严格。近些年,药品质量控制的观念也在不断发生改变,从“检验控制药品质量”到“通过生产过程控制”,继而又到“质量源于设计”理念。质量控制,特别无菌检查的可信度很低,凭无菌检查结果来判断批次是否无菌并不能确保无菌药品的质量。最终产品的无菌绝不能只参考质量检测下定论。
 
药品生产过程必须严格遵守工艺流程,药品生产所需的洁净区是无菌生产的基本要求。洁净室内的微生物种类和数量是无菌药品质量控制中重要参考内容。洁净室监控参数主要有:温湿度、压差、换气次数、风速、气流流型、悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物与人员微生物等。微生物检测是洁净室检测中的尤为重要指标。
小编就从比较新颖的角度,即通过洁净区检出菌的数量和种类,所反应出来的药品无菌生产工艺中的问题。
 
通常来说,洁净室微生物污染来源和种属概括如下:


洁净区检出菌的鉴别在污染调查中非常有用。
 
新版GMP要求,需对环境及不同阶段产品监控的微生物进行鉴定,并建立污染菌种库,便于对日常监测中出现异常菌株与菌种库进行比对,查找其来源,以便采取有效措施。
 
通常,洁净区里典型的污染菌主要来自:
·人体表面:革兰氏阳性球菌为主
·其次是环境:革兰氏阳性杆菌为主
·和各种水源:革兰氏阴性杆菌为主的微生物
 
数据表明,在所有级别的洁净区中,检出菌类别的比例大概如下:


 
污染来源举例分析
检出菌的鉴定在无菌保障工艺中非常重要,可以反映出许多细节。
举例如下:
1、当洁净区检出菌库的类别以革兰氏阳性球菌属为主的情况下,大致符合上述比例,表明洁净室继续在正常范围内起作用,不必过分担忧。
 
2、洁净区检出菌中,皮肤相关的微生物最常见,微球菌属和葡萄球菌属占50%以上,第二个最常见的属是芽孢杆菌属约占13%。
虽然革兰氏阳性微生物在洁净室中普遍存在,但其实对于葡萄球菌和微球菌属,许多物种是人类身上固有的微生物。应注意调查此部分微生物的被采集者,加强培训,提高人员的无菌意识,规范人员更衣程序和洁净区行为。
 
3、微球菌属中藤黄微球菌检出率最高,它是药物环境监测中最常见的微生物之一。通常与人体皮肤有关,尤其是与头部,手臂和腿部有关。无菌技术的缺陷以及洁净室管理不善是藤黄微球菌污染的常见原因。
 
4、芽孢杆菌属中蜡状芽孢杆菌检出率最高,蜡状芽孢杆菌的孢子通常被确定为最难消毒和根除的。根据检出地点,应引起足够重视。
 
5、丙酸杆菌和棒状菌毋庸置疑来自于人体。
但当某短时间在高级别洁净室中频繁检出如人表皮葡萄球菌属、丙酸杆菌属等来自于人体的微生物,应注意生产过程中,规范人员更衣程序和洁净区行为。或者评估所穿洁净服的过滤能力,洁净服由于反复灭菌使用,并无法保证所有重复使用的洁净服都具有相同的过滤性能。
 
6、革兰氏阳性杆出现在物体表面的频率更高。
与 AB级洁净区相比,CD级洁净室中,革兰氏阳性杆的数量相对较高。这符合正常现象,因为物品进入低级洁净室的清洁消毒程序往往较不严格。
 
7、洁净区中革兰氏阴性杆菌和真菌的检出率较低,但意味更深远,应引起特别重视。
 
8、洁净区中革兰氏阴性杆菌的比例指示水源污染程度。
在D级洁净室中, 革兰氏阴性杆菌占分离物的比例要大得多。这也反映了在这些地区水槽(水源)较多。
若在A B洁净室中革兰氏阴性杆菌的比例较高,应引起重视。可能与洁净室湿度设置过高有关,或部分水渍未及时清理擦干,也存在制药用水过滤除菌不够彻底的可能。企业可以实行无水化管理。
在检出菌的鉴别中,葡萄球菌的不同种属的鉴定可能挖掘不出太多有用的信息;但在B级洁净室中鉴别到假单胞菌样则意味着很多,务必需要扩大调查。
 
10、绝大多数来自洁净区的细菌是中温好氧或兼性需氧菌。但在使用特殊气体,有时与冷冻干燥机相关联的情况下,部分细菌可在厌氧条件下生长和被发现。
如痤疮丙酸杆菌可能在冻干制品中被发现,因为本菌为厌氧或兼性厌氧,是无菌灌封中令人头痛的一个微生物《2010GMP实施指南:无菌制剂》,根据经验,该微生物直到在培养基中培养12 天后才能生长到肉眼可以观察的浓度。
 
11、芽孢污染是制药企业车间较为严重的污染之一,应注意每月交替更换消毒剂,使用杀孢子剂定期杀灭芽孢。
 
12、洁净区中真菌的检出率也很低。如果真菌的发生率较高,鉴于真菌的生长特性,反映了一些洁净室的湿度较高或者通风不良。
特别每年梅雨季节时,空气湿度大,真菌可能快速生长繁殖,如果物品传递、脱包消毒程序不够完善,未经处理的外气流流入或者物品和人员可能携带微生物带入洁净区。
洁净室一旦有大量真菌污染,采用紫外消毒或消毒液不易杀灭,以致无菌保障水平得到严重破坏,应当重视洁净区真菌污染。
无菌测试结果为阳性时,检出菌应当鉴定到种。
应当回顾微生物监测数据,确认污染源自测试中所使用的物料或技术的差错,可判该测试无效,否则判该批次不符合要求,应调查生产或实验室存在问题,并深入全面地调查整个生产工艺。
 
最后,洁净区检出菌所反应出的信息远不止上述内容,我们目前还只是管中窥豹。无菌保障工艺中关键的方面,是将污染数据与污染控制措施相关联。重点分析微生物趋势并采取相应措施。
通过检出菌鉴别尽可能找到污染源,消除或减少污染源头的风险比依靠空气过滤器或清洁程序更有意义。